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siRNA沉默肾上腺髓质素基因对黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响

作者：张静整理来源：金宝搏网站登录技巧日期：2013-03-09

导读

近日，承德医学院附属医院皮肤科李志加、孙立新和段昕所等共同发表论文，旨在探讨小干扰RNA(siRNA)沉默肾上腺髓质素(ADM)基因对黑素瘤细胞系A375增殖和凋亡的影响。研究指出，siRNA沉默ADM基因对A375增殖有抑制作用；而对凋亡则有明显促进作用。该文章发表在2012 年45卷12期《中华皮肤科杂志》上。

　　实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)检测干扰效果，并选出干扰效果最好的siRNA。用筛选出的最有效siRNA转染A375细胞为实验组；转染非特异序列的细胞为阴性对照组，未转染的细胞为空白对照组。免疫细胞化学法蛋白水平检测干扰效果；噻唑蓝法(MTT)分别测定沉默ADM基因24、48 h后A375细胞增殖的变化；流式细胞仪(FCM)检测干扰ADM基因48 h后A375细胞的凋亡情况。

　　qRT-PCR显示ADM-siRNA-2干扰效果最好。免疫细胞化学结果显示转染ADM-siRNA-2后ADM蛋白的表达显著低于未转染组和阴性对照组。MTT结果显示，转染ADM-siRNA-2的细胞24、48 h吸光度A值为0.389±0.0375，0.469±0.0330，低于空白对照组(0.574±0.0733、0.685±0.0154)和阴性对照组(0.548±0.0376、0.676±0.0374)，差异均有统计学意义(P值均＜0.05)，空白对照组和阴性对照组比较，差异无统计学意义(P值均＞ 0.05)。FCM检测显示转染ADM-siRNA-2组的细胞早期凋亡率为(20.200±6.046)％，高于空白对照组(1.667±0.340)％和阴性对照组(4.587±1.294)％，差异有统计学意义(P值均＜0.05)，空白对照组和阴性对照组比较，差异无统计学意义(P值均＞ 0.05)。