整合稳定靶向高迁移率族蛋白B1基因shRNA载体的人脐静脉内皮细胞株建立
日前，中国医科大学附属第一医院重症医学科张晓娟、栾正刚、马晓春共同发表论文，旨在构建针对高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)基因的特异性RNA干扰载体，建立稳定转染该干扰载体的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)。研究指出，成功构建了靶向HMGB1基因的shRNA真核表达载体pRNA-HMGB1，并获得了稳定表达靶向HMGB1基因的shRNA的HUVEC细胞株，为进一步研究HMGB1在HUVEC细胞株中的生物学功能和作用机制奠定了基础。该文章发表在2012年第24卷第9期《中国危重病急救医学》上。
日前，中国医科大学附属第一医院重症医学科张晓娟、栾正刚、马晓春共同发表论文，旨在构建针对高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)基因的特异性RNA干扰载体，建立稳定转染该干扰载体的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)。研究指出，成功构建了靶向HMGB1基因的shRNA真核表达载体pRNA-HMGB1，并获得了稳定表达靶向HMGB1基因的shRNA的HUVEC细胞株，为进一步研究HMGB1在HUVEC细胞株中的生物学功能和作用机制奠定了基础。该文章发表在2012年第24卷第9期《中国危重病急救医学》上。
根据HMGB1基因的编码序列及短发夹RNA(shRNA)设计原则，设计并合成针对HMGB1基因的特异性shRNA，将其定向克隆到pRNA-u6.1/Neo载体中，同时设立阴性对照，重组载体经脂质体转染HUVEC；转染细胞经类氨基糖抗生素样物质G418筛选，采用实时荧光逆转录-聚合酶链反应检测HMGB1mRNA表达，蛋白质免疫印迹法检测HMGB1蛋白表达。
结果显示，酶切鉴定和测序证实，重组质粒shRNA序列与设计的片段完全一致。HMGB1基因特异性RNA干扰载体能够显著抑制HMGB1在HUVEC细胞中的表达(mRNA：0.4635±0.0342比1.0340±0.0352，蛋白：0.4510 ± 0.0200比1.0210±0.0110，均P＜0.05)。
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