HBV临床分离株复制型质粒的构建与鉴定
近期，十堰市太和医院生物医学研究所研究人员发表论文，旨在克隆HBV临床分离株全长基因组，构建真核表达复制载体，为研究HBV的耐药机制提供基础。研究指出，成功克隆并构建了HBV临床分离株复制型质粒，这种复制型质粒将在HBV临床分离株的耐药机制和药物敏感性等方面研究中发挥重要作用。该文发表在2015年第07期《肝脏》杂志上。 从乙型肝炎患者血清中提取HBVDNA，PCR扩增HBV全长基因组，
近期，十堰市太和医院生物医学研究所研究人员发表论文，旨在克隆HBV临床分离株全长基因组，构建真核表达复制载体，为研究HBV的耐药机制提供基础。研究指出，成功克隆并构建了HBV临床分离株复制型质粒，这种复制型质粒将在HBV临床分离株的耐药机制和药物敏感性等方面研究中发挥重要作用。该文发表在2015年第07期《肝脏》杂志上。
从乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA，PCR扩增HBV全长基因组，经SapI酶切后，克隆入pHY106载体，测序分析序列，然后用lipofectamine 2000将重组载体转染Huh7细胞，3 d后收集培养上清液，ELISA检测HBsAg、HBeAg水平；Real-time PCR检测细胞培养上清液中HBV含量；Southern印迹检测细胞内HBV复制中间体。
获得5株HBV临床分离株均为野生型，其中基因B型3株，基因C型2株。成功构建5株HBV临床分离株的复制型质粒，在转染Huh7细胞的上清液中检测到HBsAg、HBeAg及HBV DNA，细胞内检测到HBV复制中间体。
相关链接：http://med.wanfangdata.com.cn/Journal/gz.aspx
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