基于DPO的四重荧光PCR检测常见分枝杆菌方法的建立与应用
近日，浙江大学附属邵逸夫医院检验科、杭州市第一人民医院检验科和杭州市红十字会医院结核实验室的研究人员共同发表论文，旨在利用多重荧光PCR技术，建立一种快速、准确、特异的检测常见分枝杆菌的方法。本研究建立的多重荧光PCR方法敏感、特异、快速，能有效检测结核分枝杆菌和常见非结核分枝杆菌，可用于分枝杆菌感染者的实验室快速诊断。该文章发表在2012年35卷08期的《中华检验医学杂志》上。
近日，浙江大学附属邵逸夫医院检验科、杭州市第一人民医院检验科和杭州市红十字会医院结核实验室的研究人员共同发表论文，旨在利用多重荧光PCR技术，建立一种快速、准确、特异的检测常见分枝杆菌的方法。本研究建立的多重荧光PCR方法敏感、特异、快速，能有效检测结核分枝杆菌和常见非结核分枝杆菌，可用于分枝杆菌感染者的实验室快速诊断。该文章发表在2012年35卷08期的《中华检验医学杂志》上。
以分枝杆菌16S rRNA作为检测靶基因，设计双启动寡核苷酸(DPO)引物和TaqMan探针，探针的5’端分别用FAM 、ROX、HEX和JOE进行荧光标记，3’端标记淬灭荧光。通过对4种分枝杆菌标准株基因组DNA的扩增，评价多重荧光PCR方法的特异性和灵敏度。采用建立的多重荧光PCR方法，采用该方法检测2010年6至12月杭州市红十字会医院68例结核科住院患者清晨痰液标本，结果与细菌培养和抗酸染色镜检进行比较。采用x2检验比较3种方法的阳性率。
该方法可准确、特异地鉴定结核分枝杆菌和3种常见非结核分枝杆菌，检测灵敏度均为1 ×101 cfu/ml。对68份痰液标本进行检测，结果显示31份检测结果阳性，阳性率45.6％，明显高于涂片染色镜检(阳性率14.7％)，差异具有统计学意义(x2=15.4，P ＜0.05)，其中28例为结核分枝杆菌，1例为鸟分枝杆菌，2例为胞内分枝杆菌，与细菌培养鉴定方法一致。1例培养阳性而PCR检测结果阴性标本经16SrRNA扩增测序鉴定为龟分枝杆菌。
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