嗜热吸水链霉菌cDNA文库构建及其抗原相关基因的表达
中国医科大学附属第四医院呼吸内科许蕾、王玲玲、刘朔等共同发表论文，旨在构建嗜热吸水链霉菌cDNA文库并进行表达序列标签(EST)测序，从中筛选具有毒力作用的基因进行体外克隆并诱导表达。研究指出，所构建的嗜热吸水链霉菌cDNA文库符合构建基因文库的质量要求，文库中的EST数据将有助于农民肺特异性毒力分子的进一步筛选。该文发表在2012年第35卷第3期《中华结核和呼吸杂志》上。
中国医科大学附属第四医院呼吸内科许蕾、王玲玲、刘朔等共同发表论文，旨在构建嗜热吸水链霉菌cDNA文库并进行表达序列标签(EST)测序，从中筛选具有毒力作用的基因进行体外克隆并诱导表达。研究指出，所构建的嗜热吸水链霉菌cDNA文库符合构建基因文库的质量要求，文库中的EST数据将有助于农民肺特异性毒力分子的进一步筛选。该文发表在2012年第35卷第3期《中华结核和呼吸杂志》上。
利用RNA转录5’末端转换技术构建致农民肺嗜热吸水链霉菌的cDNA文库，将平板内克隆进行编号，取前1020个克隆提取质粒，进行EST测序。用生物信息学方法分析EST测序结果并预测基因功能，从中筛选出可能引起人体免疫反应的毒力因子。将这些目的基因亚克隆入pET-28a载体，将重组子转化大肠杆菌BL21，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导相应蛋白的表达。
结果显示，成功构建了较高质量的嗜热吸水链霉菌cDNA文库，得到有义序列978个，获得单一基因347个，其中2段基因分别与胸膜肺炎放线菌外膜蛋白、转铁蛋白B的同源性为51％和42％，其开放阅读框长度分别为1554bp和726bp，分别编码517和241个氨基酸。将2段基因亚克隆入原核表达载体中，IPTG诱导表达产物的相对分子质量分别为63000和30000。
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